Odatda PCR tajribalarida ishlatiladigan bir nechta fermentlar

Polimeraza zanjiri reaktsiyasi, qisqartirilganPCRIngliz tilida bu maxsus DNK parchalarini kuchaytirish uchun ishlatiladigan molekulyar biologiya texnikasi.Buni tanadan tashqarida maxsus DNK replikatsiyasi deb hisoblash mumkin, bu juda oz miqdordagi DNKni sezilarli darajada oshirishi mumkin.Butun vaqt davomidaPCRreaktsiya jarayonida moddalarning bir sinfi muhim rol o'ynaydi - fermentlar.

1. Taq DNK

ning dastlabki kunlarida tajribalardaPCR, olimlar Escherichia coli DNK polimeraza I dan foydalangan, Ammo bu ferment bilan bog'liq muammo bor: u har safar tsikl bajarilganda yangi fermentni to'ldirishi kerak, bu esa operatsiya bosqichlarini biroz murakkablashtiradi va uni to'liq avtomatik ravishda kuchaytirish qiyin.1988 yilda olimlar tasodifan Thermus aquaticus dan Taq DNK polimerazasini ajratib olishganidan so'ng bu muammo hal qilindi. O'shandan beri DNKni avtomatik ravishda kuchaytirish haqiqatga aylandi.Bu fermentning kashfiyoti ham qiladiPCRtexnologiya qulay, amaliy va universal texnologiya.Hozirgi vaqtda Taq DNK polimeraza DNK to'plamlarida eng keng tarqalgan polimeraza hisoblanadi.

2. PfuDNK

Yuqorida aytib o'tilganidek, Taq DNase katta xatoga ega, shuning uchun olimlar noto'g'ri test natijalari noto'g'ri bo'lganligi sababli o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirilishining oldini olish uchun Taq DNK polimerazasini ma'lum darajada o'zgartirdilar.Ammo Taq DNK polimerazasining modifikatsiyasi xona haroratida DNK polimeraza faolligini inhibe qilishi mumkin.PfuDNA polimeraza Taq DNK polimerazasining yuqoridagi kamchiliklarini to'ldirishi mumkin, shuning uchun PCR reaktsiyasi an'anaviy tarzda amalga oshirilishi va maqsadli gen amplifikatsiyasining muvaffaqiyat darajasi samarali ravishda yaxshilanishi mumkin.

3. Teskari transkriptaza

Teskari transkriptaza 1970 yilda kashf etilgan. Bu ferment shablon sifatida RNK dan, substrat sifatida dNTP dan foydalanadi, tayanch juftligi tamoyiliga amal qiladi va 5′-3′ yo‘nalishida RNK shablonini to‘ldiruvchi bir DNK zanjirini sintez qiladi.Teskari transkriptaza asosan DNK yoki RNK shablonlarining DNK polimeraza faolligiga bog'liq va shuning uchun 3'-5' eksonukleaza faolligiga ega emas.Biroq, u teskari transkriptaza sintez uzunligini ma'lum darajada cheklaydigan RNase H faolligiga ega.Yovvoyi teskari transkriptazaning past ishonchliligi va termostabilligi tufayli olimlar uni ham o'zgartirdilar.

UchunPCRTajribalar, asosiy sarf materiallari: individual PCR trubkasi, 4/8 chiziqli PCR trubkasi, PCR plitalari.

LabioPCR sarf materiallariquyidagilarga egaafzalliklari:

PCR plitalari: Keng termal tsikl mosligi;Yuqori kontrastli, quduqni oson aniqlash;yaxshi floresan aks ettirish;yaxshiissiqlik uzatish;Sertifikatlangan DNase, RNase, DNK, PCR inhibitörleri va sinovdan o'tgan pirojensiz.

Shaxsiy PCR naychalari: Bug'lanishga chidamli; yaxshiissiqlik uzatish;mukammal optik tiniqlik; Sertifikatlangan DNase, RNase, DNK, PCR inhibitörleri va sinovdan o'tgan pirogensiz.

4/8-chiziqli PCR naychalari: Ultra yupqa devorlar; yuqori aniqlik; yaxshi floresan aks ettirish;farmatsevtika sanoati, oziq-ovqat sanoati va molekulyar biologiyada foydalanish mumkin; yuqori sifatli, bokira PP materiali; sertifikatlangan DNase, RNase, DNK, PCR inhibitörleri va sinovdan o'tgan pirojensiz.